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在發(fā)展中求生存,不斷完善,以良好信譽和科學(xué)的管理促進企業(yè)迅速發(fā)展首頁-譜標(biāo)服務(wù)-Orbitrap Fusion三合一不同掃描方式的對比
具有靈活多樣的掃描組合方式是Orbitrap Fusion的優(yōu)勢之一,包括可以使用CID、HCD、ETD、DDDT等不同的裂解模式,可以使用Orbitrap或離子阱掃描檢測,可任意選擇破裂和檢測模式進行MS分析,可同時選擇多個二級離子進行三級定量分析(SPS技術(shù))等。
通過考察蛋白質(zhì)組學(xué)最常用的掃描方式:OT-HCD-IT、OT-CID-IT、OT-HCD-OT、OT-CID-OT。使用這四種掃描方式對酵母全蛋白進行60分鐘有效梯度的數(shù)據(jù)采集,并對鑒定結(jié)果進行分析、比較。
比較了四種掃描方式在蛋白鑒定數(shù)量、肽段鑒定數(shù)量、PSM數(shù)量、譜圖數(shù)、譜圖鑒定率五方面的差異,并以OT-HCD-IT結(jié)果作為100%進行歸一化。
結(jié)果表明,OT-HCD-IT由于速度zui快,因此獲得的譜圖數(shù)和鑒定數(shù)zui多;OT-CID-IT相比前者掃描速度略慢5%,因此獲得的結(jié)果略少,譜圖數(shù)和蛋白鑒定數(shù)約是前者的95%;OT-HCD-OT與Q-Exactive質(zhì)譜的掃描方式相同,由于無法實現(xiàn)一級二級的同時運行,譜圖數(shù)和蛋白鑒定數(shù)分別是OT-HCD-IT的70%和85%;OT-CID-OT速度zui慢,譜圖數(shù)和蛋白鑒定數(shù)分別是OT-HCD-IT的60%和75%。此外,四種掃掃描方式鑒定率相差不大,表明數(shù)據(jù)質(zhì)量沒有明顯差異。
與HCD相比,CID雖然速度略慢且有三分之一效應(yīng),但靈敏度更高,更適合于低豐度蛋白和少量樣本分析。二級Orbitrap檢測常用于定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究,TMT/iTRAQ標(biāo)記定量、PRM定量都要用到二級分辨率、高質(zhì)量精度。四種掃描方式有著各自的特點,適用于不同的應(yīng)用方向,所以根據(jù)實驗?zāi)康牟煌x擇合適的掃描方式非常重要。
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