二手HPLC液相色譜系統(tǒng)的許多問(wèn)題都能在譜圖上反映出來(lái)。其中有一些問(wèn)題可以通過(guò)改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問(wèn)題必須通過(guò)修改操作程序來(lái)解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是二手高效液相色譜儀HPLC得到好的色譜圖的關(guān)鍵。
                              

（一）二手HPLC譜圖峰拖尾的原因和解決方法 
1、篩板阻塞 ：反沖色譜柱，更換進(jìn)口篩板，更換色譜柱 ；
2、色譜柱塌陷 ：填充色譜柱 ；
3、干擾峰 ：使用更長(zhǎng)的色譜柱，改變流動(dòng)相或更換色譜柱 ；
4、流動(dòng)相PH選擇錯(cuò)誤 ：調(diào)整PH值。對(duì)于堿性化合物，低PH值更有利于得到對(duì)稱(chēng)峰 ；
5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng)圖 ：加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑，更改色譜柱。

（二） 二手HPLC譜圖 峰前延的原因和解決方法 
1、柱溫低 ：升高柱溫 ；
2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng) ：使用流動(dòng)相作為樣品溶劑 ；
3、樣品過(guò)載：降低樣品含量 ；
4、色譜柱損壞：反沖色譜柱，填充色譜柱。

（三） 二手HPLC譜圖 峰分叉的原因和解決方法

1、保護(hù)柱或分析柱污染圖 ：取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來(lái)清洗。如果問(wèn)題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果?wèn)題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。

2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相 ：改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。

（四） 二手HPLC譜圖 峰變形的原因和解決方法 
樣品過(guò)載 ：減少樣品載量

（五） 二手HPLC譜圖 早出的峰變形的原因和解決方法 
樣品溶劑選擇不恰當(dāng) ：減少進(jìn)樣體積，運(yùn)用低極性樣品溶劑。

（六） 二手HPLC譜圖 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰的原因和解決方法 
柱外效應(yīng)：調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路），使用小體積的流通池。

（七） 二手HPLC譜圖 K’增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重的原因和解決方法 
1、二級(jí)保留效應(yīng)，反相模式：加入三乙胺（或堿性樣品），加入乙酸（或酸性樣品），加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品），更換一支柱子 ；
2、二級(jí)保留效應(yīng)，正相模式 ：加入三乙胺（或堿性樣品），加入乙酸（或酸性樣品），加入水（或多官能團(tuán)化合物），試用另一種方法 ；
3、二級(jí)保留效應(yīng)，離子對(duì)：加入三乙胺（或堿性樣品）。

（八） 二手HPLC譜圖 酸性或堿性化合物的峰拖尾的原因和解決方法 
緩沖不合適：使用濃度50-100mM的緩沖液，使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液。

（九） 二手HPLC譜圖 額外的峰的原因和解決方法 
1、樣品中有其他組份：正常 ；
2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰 ：增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率，提高流速；
3、空位或鬼峰：檢查流動(dòng)相是否純凈，使用流動(dòng)相作為樣品溶劑，減少進(jìn)樣體積。

（十） 二手HPLC譜圖 保留時(shí)間波動(dòng)的原因和解決方法 
1、溫控不當(dāng) ：調(diào)好柱溫 ；
2、流動(dòng)相組分變化 ：防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等） ；
3、色譜柱沒(méi)有平衡 ：在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱。

（十一） 二手HPLC譜圖保留時(shí)間不斷變化的原因和解決方法 

1、流速變化 ：重新設(shè)定流速 ；
2、泵中有氣泡 ：從泵中除去氣泡 ；
3、流動(dòng)相選擇不恰當(dāng) ：更換合適的流動(dòng)相；選擇合適的混合流動(dòng)相。